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基因编辑细菌

传统的细菌基因编辑主要利用细菌体内广泛存在的RecBCD系统将带抗性的自杀质粒与基因组进行重组，实现目的基因的敲除。但这种方法效率极低，需要重复实验，还可能会出现回复突变，很难拿到目的基因敲除的菌株。对于大肠杆菌及个别邻近种属的细菌，λ-Red是一种较好的选择，其重组效率会比细菌体内的重组系统稍高一些，但需要用抗性基因对目的基因进行替换，替换成功后，虽然可以将重组酶转到细菌中删除抗性基因，但是还是会在基因组上留下重组位点。

基于上述问题，源井生物自主研发的CRISPR-B™技术系统，创新性地将Red/ET重组系统和CRISPR/Cas9基因编辑系统结合，利用CRISPR/Cas9系统的高效定点切割优势与基因编辑质粒载体与基因编辑流程的进一步优化，极大提高了细菌基因编辑的效率。对比前面2种方法，源井CRISPR-B™技术除了效率高，还能实现无痕敲除（即不残留抗性或重组位点，同时消除外源质粒），另外该技术可实现前面2种方法无法实现的定点突变和定点敲入，大大拓宽了细菌基因编辑的应用范围。目前，源井生物可提供大肠杆菌/沙门氏菌/铜绿假单胞菌/金黄色葡萄球菌的基因编辑（敲除/点突变/敲入）与过表达稳转株构建服务，保证交付阳性克隆。

基因编辑细菌服务详情

大肠杆菌
大肠杆菌（Escherichia coli），又叫大肠埃希氏菌，利用基因编辑技术对其基因组进行改造可以研究基因功能,或改变其代谢途径大量生产原本成本较高的产物,从而获得可以生产特定产物的遗传稳定性工程菌株。

沙门氏菌
沙门氏菌（学名：Salmonella）是肠道杆菌科下的一个属，革兰氏阴性。除了用于病原体的研究，还可用于建立常用的小鼠肠胃炎模型，探索更多遗传工具（如在伤寒杆菌中发现了第一个广泛性转导噬菌体P22）。

铜绿假单胞菌
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一种普遍存在于环境中的条件致病菌,同时也是研究革兰氏阴性菌群体感应,生物膜,毒力和耐药性的重要模式生物。

金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是革兰氏阳性菌的代表，为一种常见的食源致病微生物，可引起化脓感染、肺炎、肠炎、心内膜炎、败血症及脓毒症等。滥用抗生素使得金黄色葡萄球菌产生耐药性，现有的治疗方案效果日益不理想，故对其耐药机制及新治疗策略的研究是目前的重中之重。

服务类型：无痕基因敲除/无痕基因点突变/无痕基因敲入/基因过表达
交付成果：阳性克隆
周期/价格：在线咨询添加官方微信号：18054268871（手机同号）

客户文献

技术优势Technical advantages

基因编辑效率和重组效率是传统技术的20-30倍以上；

无痕基因编辑技术，安全有保证；

应用范围广泛，包括基因敲除，基因点突变和基因敲入；

可以同时实现多基因敲除的需求；

技术流程Work Flow

传统的基因敲除技术存在后期筛选工作量大（周期），重组效率低，残留loxP或FRT位点等缺点。CRISPR-B™技术作为一种高效的基因组编辑技术，具有操作简单、靶向性强、脱靶率低、无痕等诸多优势。通过电转的方法将CRISPR-B™系列载体导入细菌体内进行基因编辑，可实现敲除、点突变和敲入等

（1）构建 CRISPR-B™细菌系列载体

CRISPR-B™ 系列载体
CRISPR-B _CR	表达Cas9核酸酶和Red重组系统的酶
CRISPR-B _G	表达靶基因的gRNA
CRISPR-B _D	一段DNA修复模板

（2）电转及制备稳转CRISPR-B _CR的感受态

· CRISPR-B _CR电转到细菌中，菌落PCR鉴定CRISPR-B _CR是否成功转入。
· 并将成功转入CRISPR-B _CR的菌株再制成电转感受态细胞。

（3）导入CRISPR-B_G及CRISPR-B _D进行打靶

将打靶载体CRISPR-B_G及CRISPR-B _D修复模板电转进稳转CRISPR-B _CR的感受态菌株中，CRISPR系统与Red重组系统共同作用对细菌基因组进行编辑。

（4）挑取单克隆进行PCR及测序鉴定，将CRISPR-B™质粒消去，获得敲除阳性克隆菌株。

质量控制标准：1. 菌落PCR鉴定 2.靶位点测序鉴定

引用文献节选

Structural basis for bacterial lipoprotein relocation by the transporter LolCDE

单位：四川大学华西医院

摘要：

该文章采用源井生物CRISPR-B™技术在大肠杆菌的lolCDE基因前敲入araBAD启动子，结合冷冻电镜技术、诱变和体内活力测定等实验，揭示了 LolCDE 的功能残基和结构特征，为外膜脂蛋白的分选和运输机制提供了新见解，同时针对多重耐药性革兰氏阴性菌开发新疗法提供相关指导。

LolCDE中心通道中的脂蛋白识别

MutS functions as a clamp loader by positioning MutL on the DNA during mismatch repair

单位：中国科学院大学&俄亥俄州立大学

摘要：

为了探究错配修复机制（MMR）信号传递过程中的关键分子和PCC的功能，该研究采用源井生物构建的MutL基因敲除大肠杆菌，通过单分子荧光成像技术和体外重构MMR系统，证明了MutL sliding clamp才是MMR信号传递的关键分子，而MutS只是错配特异性的clamp loader，还解释了MutL PCC的功能，为DNA错配修复信号传递机制提供了新的见解。查看详情>>